新闻资讯

先看核心问题：

体外活性如何转化为开发决策？

HIV小分子药物早期研究中，EC₅₀往往是**被关注的结果。这个数字可以说明候选物在特定实验条件下对病毒复制具有抑制作用，但它无法独立回答候选物是否具有临床开发价值。

真正有用的体外药效数据，需要同时说明候选物对哪些病毒有效、活性是否受细胞类型影响、是否存在明显细胞毒性、对临床耐药病毒是否仍然有效、与现有药物是否存在交叉耐药，以及能否与后续PK/PD结果衔接。

因此，体外评价应围绕“活性—安全性—病毒谱—耐药—联合用药”逐步展开。实验项目不宜简单堆叠，每一项检测都应对应一个研发问题。

01

EC₅₀和EC₉₀：

先把结果放回实验条件中解释

在预先定义的检测体系和分析模型中，EC₅₀和EC₉₀分别表示达到50%和90%病毒抑制所对应的药物浓度。两者常用于描述抗病毒效力，但结果会受到病毒株、细胞类型、感染复数、培养时间、检测读数和分析模型影响。

因此，EC₅₀或EC₉₀不能脱离实验条件单独比较。正式报告中至少应说明：

（1）使用的病毒株或临床分离株。

（2）细胞模型及细胞状态。

（3）感染条件和药物加入时间。

  (4)检测终点和读数方式。

  (5)重复次数和统计模型。

  (6)结果是否经过质量控制。

  (7)阳性对照药物是否处于预期范围。

对于同一候选物，如果在不同细胞系统中出现较大差异，应进一步分析细胞通透性、受体表达、药物活化、细胞内代谢和蛋白结合等因素。

02

细胞毒性：

CC₅₀不能只作为附加结果

在预先设定的细胞活力或细胞毒性检测体系中，CC₅₀通常表示使细胞活力或相关细胞学读数下降约50%的药物浓度。将CC₅₀与EC₅₀结合，可以初步了解体外选择窗口。

选择指数不能直接等同于临床安全性。体外细胞毒性受到细胞类型、培养条件、暴露时间和检测方法影响；人体安全性还需要结合药代动力学、毒理学和临床安全性数据进行判断。

建议根据候选物机制和给药方式选择相关细胞模型。对于需要细胞内活化的前药、长效候选物或拟用于特殊人群的药物，单一细胞毒性结果往往不够，需要结合更长时间暴露、代谢物和相关细胞类型开展评价。

03

细胞模型：

从细胞系逐步走向临床相关体系

3.1 T细胞系

MT-4等T细胞系便于建立稳定模型，适合早期筛选、方法开发和批量比较。细胞系中的活性结果需要结合其他模型解释，不能直接代表所有感染相关细胞。

3.2 PBMC和原代CD4⁺T细胞

PBMC和原代CD4⁺T细胞更接近人体免疫细胞环境，可以用于验证候选物在不同供者来源细胞中的活性和重复性。原代细胞实验还需要关注供者差异、细胞活化状态和实验批次。

3.3巨噬细胞及其他相关细胞

如果候选物的产品定位涉及巨噬细胞、组织分布或储存库相关问题，可以根据研究目的增加相应细胞模型。模型选择应服务于具体机制和临床问题。

04

病毒面板：

标准株只是方法起点

体外抗病毒活性评价应根据项目定位建立分层病毒面板。

4.1实验室参考株

参考株适合用于方法建立、质量控制、实验室间比较和阳性对照评价。它们通常具有较稳定的实验表现，但不能覆盖临床病毒的全部遗传多样性。

4.2不同遗传亚型和重组型

不同HIV-1亚型或重组型在靶点序列和天然多态性方面可能存在差异，这些差异在部分药物或特定耐药背景下可能影响体外敏感性。因此，是否纳入某些亚型，应根据目标市场、适应症和候选物机制确定。

4.3临床分离株

临床分离株能够反映真实病毒背景、既往治疗压力和复杂突变组合。对于拟开发经治、治疗失败或多重耐药患者适应症的项目，临床分离株和具有明确耐药背景的病毒材料尤其重要。

4.4耐药代表株

耐药代表株用于判断候选物是否覆盖已知耐药突变，以及与现有药物是否存在交叉耐药。耐药突变的选择应结合候选物靶点、产品定位和最新耐药资料确定。

05

基因型耐药和表型耐药需要结合解释

基因型耐药主要通过测序识别与药物敏感性相关的突变位点。表型耐药则通过体外实验直接测量病毒对候选药物的敏感性变化。

两类检测回答的问题不同：

(1)基因型检测关注病毒发生了哪些序列变化。

(2)表型检测关注这些变化是否实际导致药物敏感性下降。

在研发项目中，**将基因型、表型、既往用药史、病毒载量和临床结局放在同一分析框架内。基因型与表型结果并非始终一一对应，解释时还需要结合病毒亚型、伴随突变、实验平台和既往治疗背景。

IAS-USA发布的2025年HIV-1耐药突变更新，可作为现有药物耐药突变解释和候选物耐药评价面板设计的参考。[2] Stanford HIV Drug Resistance Database提供HIV-1基因型耐药解释工具及部分基因型—表型相关数据，可作为耐药结果分析的辅助资源。[3]

06

体外耐药筛选：

关注突变出现和活性变化

体外连续传代可以在受控实验条件下观察候选物压力下的耐药表型和相关突变演化过程。研究过程中可关注：

(1)耐药表型**出现的传代阶段。

(2)EC₅₀或EC₉₀变化趋势。

(3)候选突变及其频率。

(4)病毒复制能力变化。

(5)关键突变的反向遗传学验证。

(6)与现有药物的交叉耐药。

连续传代结果受病毒株、药物浓度、传代方式、细胞模型、测序深度和实验周期影响。结果应作为耐药风险评估的一部分，与临床暴露、联合治疗和病毒学数据结合解释。

“传代过程中未发现突变”可以说明在当前实验条件下没有观察到明确耐药信号，但不能单独证明候选物在临床中具有高耐药屏障。

07

联合用药评价：

把候选物放进真实治疗背景

HIV治疗通常采用联合方案，因此候选物需要结合拟定的临床治疗位置开展组合研究。早期可以根据产品定位选择代表性药物，观察：

(1)协同作用。

(2)相加作用。

(3)拮抗作用。

(4)对病毒复制动力学的影响。

(5)对耐药选择的影响。

(6)与候选物作用机制是否互补。

联合用药实验的分析方法应根据设计和数据特点选择，不能仅凭单一组合指数作出结论。实验条件、药物比例、浓度范围和分析模型都会影响结果。

08

体外药效与PK/PD需要提前衔接

体外活性数据需要与人体暴露、临床药理和病毒学终点结合，才能为临床剂量和给药方案提供依据。后续PK/PD分析需要关注：

(1)EC₅₀和EC₉₀与人体游离药物暴露的关系。

(2)细胞内有效浓度。

(3)活性代谢物。

(4)给药周期内暴露覆盖。

(5)蛋白结合和组织分布。

(6)暴露不足时的耐药风险。

FDA关于HIV-1抗逆转录病毒药物开发的指导文件涵盖病毒学疗效、临床药理、安全性、耐药和临床研究设计等开发内容。[1] 因此，体外药效报告应尽量保留完整实验条件和原始数据，方便后续与PK/PD和临床病毒学结果进行整合。

09

体外评价中常见的几个问题

9.1只报告一个EC₅₀

缺少细胞、病毒株、检测方法和重复信息时，单个EC₅₀很难判断可靠性。

9.2只做实验室标准株

标准株适合质控，但不能代表临床病毒谱和耐药背景。

9.3只做基因型耐药

发现突变后，还需要通过表型实验确认敏感性是否真正下降。

9.4只做单药评价

HIV药物最终通常进入联合治疗方案，候选物需要尽早评价联合用药关系。

9.5把体外选择指数当作人体安全性结论

体外选择窗口可以支持早期筛选，但不能替代动物毒理和临床安全性评价。

08

昌柏科技可提供的支持

昌柏科技可根据项目阶段提供HIV小分子药物EC₅₀、EC₉₀、CC₅₀和选择窗口评价，多亚型和临床分离株检测，耐药代表株评价，连续传代耐药筛选，耐药突变测序和分析，联合用药研究，以及体外药效数据与后续PK/PD研究的衔接支持。

参考文献

[1] U.S. Food and Drug Administration. Human Immunodeficiency Virus-1 Infection: Developing Antiretroviral Drugs for Treatment: Guidance for Industry. Center for Drug Evaluation and Research; 2015 Nov 2. Available from: https://www.fda.gov/files/drugs/published/Human-Immunodeficiency-Virus-1-Infection--Developing-Antiretroviral-Drugs-for-Treatment.pdf (accessed 24 September 2026).

[2] Wensing AMJ, Calvez V, Ceccherini-Silberstein F, Charpentier C, Günthard HF, Jacobsen DM, Paredes R, Shafer RW, Richman DD. 2025 update of the drug resistance mutations in HIV-1. Top Antivir Med. 2025;33(2):457–473. PMID: 40472382. Available from: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/40472382/ (accessed 24 September 2026).

[3] Stanford University. Stanford HIV Drug Resistance Database. Available from: https://hivdb.stanford.edu/ (accessed 24 September 2026).

关于昌柏科技

安吉昌柏科技有限公司，聚焦于菌毒应用，尤其是传染病领域，形成了传染病药物与疫苗筛选评价、兽用药物疫苗开发评价、菌毒种放行检测等多个业务模块。目前可提供100余种传染病药物与疫苗相关评价管线，覆盖90%的主流研发管线。现有菌毒种资源广泛，覆盖病毒、细菌、真菌、支原体，且主要为国内三年内流行菌毒株。所有临床菌毒株来源清晰、合规、可溯源。可使用A/BSL-3级生物安全实验室，备案14种高致病性病原。A/BSL-2实验室1000平米以上，备案47种病原，负压笼位3000余笼。昌柏科技凭借优质的服务，**的专家团队储备，为国内外多家传染病药物及疫苗公司长期提供药效学评价与临床生物样本分析服务。